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產(chǎn)品名	RIPA裂解液（強(qiáng)，不含PMSF）
別名
英文名
CAS號(hào)
分子式
分子量
EINECS編號(hào)
MDL號(hào)

操作步驟(僅供參考)： 1.?取適當(dāng)量的RIPA Lysis Buffer，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF(自備)，使PMSF的最終濃度為1mM。 注意：本品不含蛋白酶等抑制劑，根據(jù)需要在使用前添加蛋白酶、磷酸酶等抑制劑。 2.?樣品前處理 (a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 (b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。 (c)對(duì)于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片，按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)，用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。 3.?上述樣品轉(zhuǎn)移至冰上，裂解30分鐘，中間15分鐘后補(bǔ)加一次終濃度1mM PMSF。充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。